RapidVet H Canine DEA 1.1 - Determinarea grupelor sanguine la caine 20 teste

Determinare Grupelor De Sange La Caine

 

    Deoarece in medicina veterinara transfuziile sangvine au cunoscut o crestere remarcabila in ultimii ani, cunoasterea grupelor sangvine este imperios necesara.

 Este cunoscut faptul ca la o prima transfuzie incompatibila din punct de vedere al grupei sangvine nu apar semne clinice. Anticorpii impotriva antigenelor straine de pe eritrocitele sangelui tranfuzat apar abia in 5-7 zile, timp dupa care o noua transfuzie incompatribila va determina semne clinice de care veterinarul va trebui sa tina cont.

   Determinarea grupelor sangvine la caini are importanta si pentru realizarea imperecherilor si pentru o mai buna intelegere a problemelor ce pot aparea la pui ( izoeritroliza). O femela cu anticorpi impotriva unei anumite grupe sangvine nu trebuie imperecheata cu un mascul ce poseda acea grupa sangvina pentru a se evita aparitia eritrolizei neonatale la puii, mai ales daca acestia vor consuma colostru.

 

     La caini pe suprafata eritrocitelor au fost identificate 8 antigene specifice. Astfel sistemul de grup sangvin pentru caine acceptat la nivel international este DEA (Dog Erythrocyte Antigen)

Conform acestui sistem grupele sangvine comune cainilor sunt :DEA1.1, DEA1.2, DEA3, DEA4, DEA5, DEA6, DEA7, DEA8.

 Grupele DEA1.1 si DEA1.2 sunt cele mai importante grupe sangvine, datorita faptului ca dintre cele 8 acestea 2 au cea mai mare putere antigenica. Toate grupele sangvine au putere stimulatoare pentru formarea de anticorpi, insa DEA1.1 cu precadere.

     La o transfuzie sangvina cu sange de tipul DEA1.1  la un caine cu o alta grupa sangvina vor aparea semne clinice catastrofale. Si in cazul unei transfuzii cu sange de tip DEA1.2  semnele clinice nu vor intarzia sa apara , dar vor fii de o intensitate mai redusa.

Grupa sangvina DEA 7 are si ea o putere antigenica mai crescuta fata de celelate dar nu determina reactii clinice notabile in caz de o transfuzie incompatibila deoarece poseda o putere de aglutinare scazuta si anticorpi prezenti in mod natural.

Celelalte grupe sangvine ( DEA3, DEA4, DEA5, DEA6, DEA8 ) nu determina reactii clinice semnificative in caz de transfuzii incompatibile.

      In concluzie, in caz de o transfuzie sangvina la caine trebuie evitate grupele sangvine DEA1.1 si DEA1.2.  Caini obtinuti prin anumite incrucisari, precum cei din rasa Greyhounds sunt considerati donatori de sange datorita faptului ca un procent foarte mic dintre acestia prezinta antigenele grupurilor DEA1.1, DEA1.2  si DEA7.

S-a calculat ca aproximativ 50 % dintre caini au grupa sagvina DEA1.1.

Indivizii cu DEA1.1 pot primii sange prin transfuzie de la oricare din cele 8 grupe sangvine, in timp ce indivizii cu DEA1.2, DEA3, DEA4, DEA5, DEA6, DEA7 si DEA8 nu pot primi sange tip DEA1.1 ci doar din celelalte 7 tipuri.

 

 

 

   Principiul testului

 

  Testul RapidVet-H (Canine 1.1)  se bazeaza pe reactia de aglutinare ce apare atunci cand eritrocite ce au pe suprafata lor antigene din tipul DEA1.1 sunt puse in contact cu un antiser liofilizat specific.

Eritrocitele ce au pe suprafata lor antigene din tipul DEA1.1 vor produce aglutinarea, in timp acelea ce nu poseda  aceste antigene nu vor aglutina. Aglutinarea se citeste cu ochiul liber.

 

! Atentie   Un procent mic de  indivizi prezinta o reactie auto-aglutinare. Daca apare aceasta reactie testul nu va putea fi performat fara o procedura de spalare celulara anterioara.

Kit-ul de testare Rapid Vet-H(Canine 1.1) furnizeaza un card de testare fara reactivi pentru identificarea acestor indivizi.

 

Card-urile testelor de aglutinare contin 3 godeuri:

            1)ecranul de auto-aglutinare

            2)DEA 1.1 pozitiv control

            3)testare pacient

 

 

 

      Fiecare card de testare este ambalat separat si trebuie depozitat la 2-7 grade C.

-          o sticla cu o solutie de diluare

Sticla trebuie sa fie de plastic, transparenta cu 2 ml solutie de 0.02mol/L PBS la pH 7,4 si trebuie depozitata la 2-7 grade C.

-    un flacon cu solutie pentru “pozitiv control�

Flaconul este din plastic de culoare alba si contine 0,5 ml de material biologic ; trebuie depozitat la 2-7 grade C.

-    pipete si baghete

      Fiecare kit trebuie sa contina 2 pipete si 3 baghete.

 

Depozitare si valabilitate

-          card-urile si solutia de diluare depozitate la o temperatura corespunzatoare au o valabilitate de 19 luni de la data fabricatiei.

-          Solutia de diluare depozitata la o temperatura corespunzatoare are o valabilitate de 2 ani de la data fabricatiei.

-          Solutia de control depozitata la o temperatura corespunzatoare are o valabilitate de 8 luni de la data fabricatiei.

 

Fiecare test RapidVet-H trebuie sa fie inscriptionat cu data de expirare.

 

 

 

 

Procedura

1. Se preleveaza sange, de la individul de testat,  pe EDTA. Cantitaea de sange necesara testului este de numai 150 microL, dar este necesara recoltarea unei cantitati de 0,4 ml de sange pentru a realiza concentratia corespunzatoare de EDTA.
2. Se scoate card-ul de testare din punga lui de plastic
3. Se inscriptioneaza numele sau numarul corespunzator individului testat precum si data pe card-ul de testat
4. Se pozitioneaza card-ul pe o suprafata plana
5.  Se pune o picatura de solutie de diluare (50 microL) in godeul intitulat “Auto-Agllutination Saline Screen�
6. Se aspira cu pipeta sange (50 microL), de la individul de testat, din eprubeta, si se pune in acelas godeu mentionat mai sus urmand amestecarea cu bagheta timp de 10 sec apasand ferm
7. Un procent mic de  indivizi auto-aglutineaza (6%) Acest lucru s-ar datora existentei unui virus sau a unor substante ce afecteaza integritatea eritrocitelor. Daca la acest punct se observa aglutinarea se opreste procedura si se face o procedura de spalare celulara inainte de a continua
8. Se pune cate o picatura de solutie de diluat si in celelalte 2 godeuri ramase
9. Invartiti cu prudenta eprubeta ce contine sangele de testat pentru a repune in suspensie materia solida formata
10. Se deschide flaconul cu solutia de control si se pune pe masa de lucru in apropierea card-ului de aglutinare.
11. Se aspira cu pipeta sange din eprubeta si se pune o picatura (50microL) in godeul marcat “DEA1.1 Pozitiv Control�. Cu bagheta se amesteca presand ferm timp de 10 secunde.
12. Se aspira cu pipeta sange din eprubeta si se pune o picatura (50 microL) godeul marcat “Patient Test�. Cu bagheta se amesteca presand ferm timp de 10 secunde. Pentru cele 2 godeuri de folosesc baghete diferite
13. Se amesteca prin miscari de pendulare a mainii inainte si inapoi timp de 2 minute avand grija sa nu curga sange dintr-un godeu in celalalt

 

14. Plasati card-ul la un unghi de 10-20 de grade pentru a permite sangelui in exces sa ajunga in tot godeul

 

15. Se citeste rezultatul si se noteaza godeul unde a avut loc aglutinarea
16. Dupa uscare cardul utilizat se repune in punga sa de plastic

17.  Inainte de a pune solutia de control in godeul corespunzator agitati bine flaconul pentru a evita eventualele depuneri ce ar putea obstructiona prelevarea. Flaconul trebuie pastrat in pozitie verticala.

 

 

Nota 1  Utilizarea pipetei:

Pipetele kit-ului de testat sunt realizate astfel incat la apasare sa lase in godeu exact cantitatea necesara (50 microL).

            Intotdeauna se vor folosii pipete si baghete curate pentru fiecare individ in parte.

Nota 2  Capatul pipetei poate fi obstructionat de filamente de fibrina. Kit-ul de testare furnizeaza                o pipeta in plus pentru a preintampina aceste situatii.

 

 

Rezultate

Daca testarea a fost corect realizata aglutinarea trebuie sa fie vizibila in godeul “DEA1.1 Pozitiv Control�.

Daca aglutinarea va fi prezenta in godeul “ Auto-Agllutination Saline Screen� va fi greu de precizat un rezultat cert al testului.

Daca in godeul de testare al pacientului apar aglutinate mari si nu apare aglutinare in godeul “ Auto-Agllutination Saline Screen� pacientul are grupul sangvin DEA1.1 . Daca in godeul de testare al pacientului nu apare aglutinarea acesta nu are grupul sangvin DEA1.1.

Granulatiile fine asemanatoare unei aglutinari ce apar dupa 2 min nu trebuie luate in considerare.

Dimensiunile si viteza de aglutinare a eritrocitelor unui pacient tip DEA1.1 pot fii diferite fata de cele de la controlul pozitiv.

In cazul in care  individul de testat este foarte  anemic aglutinarea nu va mai avea aceleasi caractere.

 

 

Observatii

Pentru a obtine rezultate veridice trebuie respectati cu strictete toti pasii procedurii.

Intotdeauna se vor folosii pipete si baghete curate pentru fiecare individ in parte.

A nu se utiliza materialele dupa data de expirare.

Pentru diluare se va folosi doar solutia de diluare furnizata de test.

 

 

 

Probleme ce pot aparea in timpul testarii