RapidVet H Feline - Determinare grupelor de sange la pisica 20 teste

 Pentru detalii despre cercetarile si rezultatele determinarilor grupelor de sange obtinute in cadrul Facultatii de Medicina Veterinara-Bucuresti click aici.

 

  Deoarece in medicina veterinara transfuziile sangvine au cunoscut o crestere remarcabila in ultimii ani, cunoasterea grupelor sangvine este imperios necesara. Identificarea grupelor sangvine este importanta si pentru evitarea eventualelor greseli in transfuziile fetale.

 

  La pisici a fost descries un sistem de grupe sangvine alcatuit din 2 antigene: A si B. Astfel grupele sangvine ce apartin acestui sistem sunt tipul A, tipul B si tipul AB. Aceste antigene (A si B) nu sunt relationate cu cele ce apar la om. Incidenta tipurilor sangvine variaza in functie de rasa. Grupa sangvina este  mostenita genetic iar tipul A este dominant. Majoritatea pisicilor au antigena A iar aproximativ o treime din acestea au in mod natural un titru scazut de anticorpi anti-B. Toti indivizii cu tipul B au insa un titru crescut de anticorpi anti-A.

    Un studiu recent din S.U.A. arata ca procentul de indivizi cu tipul B variaza de la 0,3% la 59% in functie de rasa.

     

 

 

  Tipul AB este rar. Indivizii ce prezinta acest tip sangvin au ambele antigene (A si B) prezente pe membrana eritrocitara si nu prezinta si nici nu dezvolta anticorpi anti-A sau anti-B.

  

 

    Importanta cunoasterii grupelor sangvine la pisica

 

  In cazul unei transfuzii sangvine, cunoasterea grupelor sangvine este de maxima importanta.

  Indivizii cu tipul B carora li se va administra sange de tipul A vor avea o reactie anafilactica rapida si catastrofala (hipotensiune, bradicardie, apnee, mictionari si defecari necontrolate, voma, depresie neurologica severa) precum si semne ale hemolizei ( hemo-

globinemie si hemoglobinurie). Acest fapt se explica prin prezenta unui titru crescut de anticorpi anti-A la toti indivizii cu tip B

   Indivizii cu tipul A carora li se va administra sange din tipul B vor prezenta o reactie net diminuata datorita titrului scazut de anticorpi anti-A, in schimb vor dezvolta un titru moderat ce va fii resimtit la o noua transfuzie.

 

   Determinarea grupelor sangvine la pisica are importanta si pentru realizarea imperecherilor si pentru o mai buna intelegere a problemelor ce apar la pui.

Izoeritroliza neonatala poate aparea ca o consecinta de  incompatibilitate intre sangele matern si cel fetal. Datorita titrului crescut de anticorpi anti-A la indivizii de tip B izoeritrocitoza neonatala  va aparea la puii cu tip A rezultati din imperecherea unei femele de tip B cu un mascul tip A.  Anticorpii anti-A maternali sunt prezenti in colostru de unde sunt absorbiti de nou-nascut caruia ii vor distruge eritrocitele. Puii nu vor avea semne clinice la fatare dar dupa alaptare se poate inregistra moartalitate in decurs de cateva zile.

 

 

 Testul RapidVet-H (varianta penru feline) a fost creat pentru determinarea grupelor sangvine si clasificarea lor in tipurile: A, B, sau AB.

 

      Principiul testului

 

  Testul RapidVet-H se bazeaza pe reactia de aglutinare ce apare atunci cand eritrocite ce au pe suprafata lor antigene din tipul A, B sau AB sunt puse in contact cu un antiser liofilizat specific uneia dinte antigene. Aglutinarea se citeste cu ochiul liber (in cazul reactiei de aglutinare va aparea in godeul corespunzator o usoara tenta de roz). Caracteristicile aglutinarii vor fi diferite pentru tipul A fata de tipul B datorita naturii diferite a antiserului utilizat. Asfel, eritrocitele tipului A vor aglutina in contact cu cu antiserul specific. Tipul B va reactiona similar iar tipul AB va aglutina in ambele cazuri.

 

Reagenti si materiale

 

Fiecare card va prezenta 3 godeuri:

1. ecranul de auto-aglutinare (proba martor)
2. testare individ tip A
3. testare individ tip B

 

      Fiecare card de testare este ambalat separat si trebuie depozitat la 2-7 grade C.

-          o sticla cu o solutie de diluare

Sticla trebuie sa fie de plastic, transparenta cu 2 ml solutie de 0.02mol/L PBS la pH 7,4 si trebuie depozitata la 2-7 grade C.

-    pipete si baghete

Fiecare kit trebuie sa contina 2 pipete si 3 baghete.

 

 

Depozitare si valabilitate

-          card-urile si solutia de diluare depozitate la o temperatura corespunzatoare au o valabilitate de 18 luni de la data fabricatiei.

-          Fiecare test RapidVet-H trebuie sa fie inscriptionat cu data de expirare.

 

 

 

 

Procedura

1. Se preleveaza sange, de la individul de testat,  pe EDTA. Cantitaea de sange necesara testului este de numai 150 microL, dar este necesara recoltarea unei cantitati mai mari de sange pentru a realiza concentratia corespunzatoare de EDTA.
2. Se scoate card-ul de testare din punga lui de plastic
3. Se inscriptioneaza numele sau numarul corespunzator individului testat  pe card
4. Se pozitioneaza card-ul pe o suprafata plana
5. Se pune o picatura de solutie de diluare (40 microL) in godeul intitulat “Auto-Agllutination Saline Screen�
6. Se aspira cu pipeta sange (50 microL), de la individul de testat, din eprubeta, si se pune in acelas godeu mentionat mai sus urmand amestecarea cu bagheta timp de 10 sec apasand ferm
7. Un procent mic de  indivizi auto-aglutineaza. Daca la acest punct se observa aglutinarea se opreste procedura si se face o procedura de spalare celulara inainte de a continua
8. Se pune cate o picatura de solutie de diluat si in celelalte 2 godeuri ramase
9. Invartiti cu prudenta eprubeta ce contine sangele de testat pentru a repune in suspensie materia solida formata
10. Se aspira cu pipeta sange din eprubeta si se pune cate o picatura in cele 2 godeuri marcate “Patient Test�. Cu bagheta se amesteca presand ferm timp de 10 secunde. Pentru cele 2 godeuri de folosesc baghete diferite
11. Adaugati inca o picatura de solutie de diluare in godeul marcat “Type A� fara insa a amesteca
12. Se amesteca prin miscari de pendulare a mainii inainte si inapoi timp de 2 minute avand grija sa nu curga sange dintr-un godeu in celalalt
13. Plasati card-ul la un unghi de 10-20 de grade pentru a permite sangelui in exces sa ajunga in tot godeul
14. Se citeste rezultatul si se noteaza godeul unde a avut loc aglutinarea
15. Dupa uscare cardul utilizat se repune in punga sa de plastic

 

 

Rezultate

Daca testarea a fost corect realizata aglutinarea trebuie sa fie vizibila in cel putin unul dintre godeurile marcate “Patient test�.

Daca apare aglutinare in godeul marcat “Type A� individul testat are grupa A.

Daca apare aglutinare in godeul marcat “Type B� individul testat are grupa B.

Daca apare aglutinare in ambele godeuri individul testat are grupa AB.

Aglutinarea de la tipul B se prezinta diferit fata de tipul A. In godeul pentru tipul B va aparea un numar mic de aglutinate mari in timp ce in godeul pentru tipul A va aparea un numar mare de aglutinate mici.

In cazul in care  individul de testat este anemic sau la unii indivizi cu tipul A aglutinarea poate sa nu apara. Se recomanda a se incerca repetarea fara a mai utiliza PBS pentru godeurile “Patient test�.

 

 

Observatii

Intotdeauna se vor folosii pipete si baghete curate pentru fiecare individ in parte.

A nu se utiliza materialele dupa data de expirare.

Pentru diluare se va folosi doar solutia de diluare furnizata de test.

Intotdeauan se va recolta o cantitate mai mare de sange de la animalul de testat pentru a realiza o concentratie corespunzatoare de EDTA.

 

 

Performante

La o testare cu RapidVet-H, dintr-un total de 2116 pisici, utilizand anticorpi anti-A monoclonali, 2075 de indivizi au fost tip A, 31 tip B si 10 tip AB. Rezultatele au fost confirmate cu testari prin alte metode.

 

Dispensarea

Dispensarea  materialelor biologice folosite trebuie realizata prin metode corespunzatoare si conform legilor in vigoare.

 

Nota

Reagentii si materialele folosite in producerea kit-urilor au fost controlate din punct de vedere caliatativ prin teste standard de catre producator.

 

 

Probleme ce pot aparea in timpul testarii